Warning: Use of undefined constant videoembedder_options - assumed "videoembedder_options" (this will throw an Error in a future version of PHP) in /home/d/dana21j3/сайт/public_html/wp-content/plugins/video-embedder/video-embedder.php on line 608

Покраска кузова автомобиля представляет собой длительный и трудоемкий процесс, который обычно доверяют профессиональному автомаляру. Однако при должных теоретических и практических навыках, в сочетании с аккуратностью при работе, возможно самостоятельно добиться прекрасных результатов. Перед началом покрасочных работ важно внимательно изучить советы профессионалов, а также подобрать правильные материалы и .

Очень важным моментом, который иногда игнорируется или вовсе забывается, является выбор места для покраски. Ни в коем случае нельзя проводить покраску на открытом воздухе. В данном случае пыль и мошкара обязательно испортят конечный результат и вызовут дефекты покраски.

Покраска кузова авто включает в себя две стадии:

• подготовка кузова к покраске;
• непосредственно покраска.

Наилучшим вариантом является покраска в – специальном месте, где созданы наилучшие условия для достижения хорошего результата. Однако покраску кузова автомобиля своими руками можно осуществлять и в гараже, при должной его подготовке.
Для этого необходима тщательно подмести пол, убрать ненужные вещи, которые могут служить источником пыли и, по возможности смыть водой стены и пол.

Обратите особое внимание на подготовку кузова к покраске

Подготовка кузова автомобиля к покраске является очень важной стадией, от качества выполнения которой зависит не только внешний вид автомобиля, но и срок службы краски. В самом начале автомобиль необходимо тщательно вымыть. Затем следует снять все декоративные элементы с кузова, которые не будут окрашиваться, а несъемные элементы тщательно заклеиваются малярным скотчем или обрабатываются специальной смесью, защищающей от краски и лака. Защитную смесь следует наносить крайне аккуратно, не допуская ее попадания на части кузова, которые будут окрашиваться, так как краска не будет держаться на такой поверхности.

Для удобства покраски автомобиля рекомендуется производить разборку элементов кузова. Обычно снимаются двери, капот, крышка багажника, а иногда передние крылья. Данная процедура не является обязательной, однако позволяет лучше выкрасить труднодоступные элементы кузова.

Следующей стадией в подготовке к покраске кузова авто является выявление дефектов краски и ржавчины. Необходимо тщательно несколько раз изучить всю поверхность автомобиля, чтобы не пропустить ни одной ржавчины. Для этого необходимо использовать помещение с хорошим освещением с разных сторон.

Ржавчина с поверхности кузова удаляется двумя способами:

• Механическая зачистка
• Химический способ (травление)

Механическая зачистка ржавчины осуществляется крупнозернистой шлифовальной шкуркой, стальными щетками или любым другим абразивным материалом. При необходимости зачистки больших поверхностей можно воспользоваться орбитальной машинкой. Для того, чтобы избежать появления пыли, ржавчину перед шлифовкой можно смочить уайт-спиритом или керосином.

Химическая очистка от ржавчины подразумевает растворение ржавчины с помощью растворов кислот или кислых солей, входящих в состав средства для травления. После растворения ржавчина снимается обычной ветошью, а поверхность обрабатывается любым растворителем. Иногда при глубоком проникновении ржавчины, поверхность предварительно необходимо зачистить механически, для облегчения проникновения травящей смеси.

Поскольку очищенная от ржавчины поверхность кузова представляет собой «голый» металл, то его необходимо защитить от повторной коррозии. Для этого на обезжиренную поверхность наносится 1-2 слоя кислотного грунта. В последствии непосредственно на этот грунт будет наноситься обычный акриловый грунт.

2. Шлифование и обезжиревование поверхности

Следующим этапом в подготовке к покраске кузова автомобиля своими руками является обработка лакокрасочного покрытия всей окрашиваемой поверхности авто наждачной бумагой, до образования однородного матового цвета. Этот этап обязателен, так как на глянцевой лакокрасочной поверхности новая краска не будет держаться.

Ошкуривание является очень трудоемкой процедурой. Для ускорения обычно используют орбитально-шлифовальные машинки со специальными кругами для шлифовки, либо шлифовальный рубанок. В труднодоступных местах прибегают к ручному шлифованию с помощью наждачной бумаги. Шлифовка также позволяет выровнять поверхность кузова, избавив от царапин и других мелких изъянов старой краски.

После получения однородного матового слоя краски, поверхность автомобиля необходимо тщательно обдуть для удаления образовавшейся при шлифовке пыли. Следует быть особенно внимательным при обдувке труднодоступных мест. Далее поверхность автомобиля обезжиривается с помощью ацетона или уайт-спирита. При этом рекомендуется использовать специальную безворсовую салфетку, а после испарения обезжиривающей жидкости, тщательно пройтись по кузову пылесборной салфеткой.

Перед покраской кузова автомобиля, его необходимо загрунтовать с помощью акрилового грунта. Обычно грунт бывает белого или черного цвета. Грунт белого цвета используют для светлых тонов краски, черный, соответственно, – для темных. Кроме этого белый и черный грунт одного производителя можно смешивать в различных пропорциях для получения необходимого тона.

Грунтовка наносится на кузов автомобиля с помощью пульверизатора. Для экономии грунта лучше использовать пульверизатор с верхним расположением бака. При необходимости, перед применением грунт разбавляется растворителем в соответствии с рекомендациями производителя.

Грунт наносится на кузов авто обычно в два слоя, с промежуточной сушкой между слоями. Первый слой наносится горизонтальными полосами, чтобы каждая следующая перекрывала предыдущую наполовину. Не стоит пытаться сразу добиться непрозрачности грунта, так как это может привести к слишком толстому слою грунта или образованию потеков. После 15-20 минут можно приступать ко второму слою, который наносится перпендикулярно первому.

Если после нанесения двух слоев на поверхности еще остались участки, где грунт просвечивается, то необходимо сделать еще один слой. Затем перед началом следующего этапа подготовки к покраске кузова авто, необходимо дать полностью высохнуть грунту. Это занимает несколько часов и зависит от толщины и количества слоев грунта.

Далее следует стадия шлифования всей загрунтованной поверхности автомобиля. Шлифование можно осуществлять сухим способом, а также с использованием воды. Второй способ позволяет избавиться от пыли, однако может вызвать коррозию метала.

Поверхность грунта шлифуется до получения идеально гладкой поверхности. Для этих целей применяют наждачную бумагу с различным размером зерна. Для шлифования поверхности под нанесение краски с лаком используют бумагу 800, для получения поверхности под акриловую краску зашкуривание грунта производят наждачной бумагой с размером зерна 600.

Довольно часто после проведения шлифования грунта на поверхности кузова остаются мелкие, трудно заметные дефекты, которые после покраски обязательно дадут о себе знать. Для предотвращения таких ошибок рекомендуется использование проявочного порошка, который, при нанесении на корпус автомобиля проявляет все скрытые недостатки.

После завершения шлифования грунта необходимо повторить стадии обдувки, обезжиривания и протирания поверхности автомобиля пылесборной салфеткой. Затем необходимо как можно скорее приступить к непосредственной покраске кузова автомобиля, чтобы избежать вероятности его засорения.

Этапы покраски кузова автомобиля

Наилучших результатов при покраске можно добиться использованием метода напыления с помощью краскопульта (пистолета) для покраски. Однако и этот способ может вызвать брак при неправильном подборе диаметра сопла краскопульта. Он зависит от вязкости краски. Поскольку для каждого слоя покраски используется эмаль с определенной вязкостью, то для работы подбирают, как правило, несколько различных пистолетов.

При вязкости краски 18-22 секунды рекомендуется использовать сопло с диаметром 1,3-1,4 мм. Вязкость эмали 30-35 секунд требует использования пистолета с соплом 1,6-1,8 мм. При неправильно выбранном сопле краска вместо того, чтобы распыляться, будет разбрызгиваться по поверхности, образуя потеки и неровности.

Покраску кузова авто с помощью краскопульта следует проводить на расстоянии 30-35 см от поверхности. Очень важно выдерживать это расстояние на всем протяжении покраски. Если держать краскопульт слишком близко, то избежать образования потеков и разводов будет очень трудно. В случае слишком большого расстояния до поверхности большая часть краски не будет просто попадать на поверхность кузова, что приведет не только к перерасходу эмали, но и к тому, что она будет плохо держаться на автомобиле.

1. Настройка факела краскопульта

Рекомендуется, чтобы форма факела при нанесении краски на поверхность была овальной с размером в большей стороне около 30 см. Такая форма достигается правильным регулированием давления подачи воздуха. При слабом давлении краска будет плохо разбрызгиваться, образуя на поверхности капельки. При слишком сильной подаче воздуха факел будет иметь форму восьмерки.

При покраске кузова автомобиля своими руками следует следить за тем, чтобы факел краски наносился на поверхность под 90 градусов. Допустимое отклонение не должно превышать 5-10 градусов, иначе получится неоднородное покрытие. Перемещать пистолет при покраске необходимо со скоростью 30-40 см/с. Если слишком спешить, то поверхность не будет прокрашиваться полностью, если же передвигать краскопульт слишком медленно, то будут образовываться потеки и неровности. Поэтому при высокой окружающей температуре используют замедляющие процесс испарения растворители, а при низких температурах – ускоряющие испарение.

Для подготовки краски к нанесению, ее необходимо разбавить растворителем. При этом нужно подобрать не только количественное соотношение компонентов, но и вид растворителя в зависимости от окружающей среды. Если растворитель испаряется слишком быстро, то краска не успеет хорошо разгладиться по поверхности и образует шагрень. При слишком длительном испарении краска, наоборот, слишком сильно растекается, образуя потеки.

После того, как краска доведена до необходимой густоты, подобран подходящий краскопульт, выбрано давление подачи воздуха, нужно обязательно провести пробную покраску на ровной металлической поверхности. Эта процедура позволит выявить возможные ошибки при подготовке краски и оборудования и своевременно устранить их. Кроме этого, вы сможете потренироваться в покраске, если не делали этого ранее, или освежить предыдущий опыт.

Покраска кузова авто, как правило, производится тремя слоями. В результате конечная толщина краски составляет от 70 до 120 мм. Если автомобиль окрашивается в металлик, то, после высыхания краски, обязательно наносится несколько слоев лака.

Вначале наносится проявочный слой краски. Он более тонкий чем последующие слои, при этом допускается наличие небольших не закрашенных участков, которые затем скроются двумя последующими слоями. Гораздо хуже появление трудно устранимых потеков при слишком толстом слое нанесения.

1. Для первого слоя при покраске кузова авто используют эмаль с большей, чем последующие для последующих вязкостью. При этом она наносится тонким слоем, быстрыми горизонтальными движениями, постепенно перемещаясь сверху вниз. При нанесении первого слоя, а также всех последующих за ним, каждая новая полоса краски наносится параллельно вышележащей с перекрытием примерно на 50 процентов. После нанесения первого слоя необходимо дать ему просохнуть в течение 5-10 минут в зависимости от температуры в гараже.
2. Перед нанесением второго слоя краски следует еще раз тщательно изучить всю поверхность кузова на предмет наличия незамеченных дефектов. Первый проявочный слой краски позволяет лучше проявить такие дефекты.
3. На следующей стадии покраски кузова автомобиля эмаль необходимо наносить более толстым слоем. При этом нужно быть аккуратнее, чтобы краска наносилась равномерно без образования пятен. Второй слой эмали наносят перпендикулярно первому, вертикальными полосами. Такая технология позволяет избежать непрокрашенных областей.
4. Для третьего слоя краска должна быть наиболее жидкой. Обычно он наносится более тонким слоем, чем при второй стадии.

После завершения покраски кузова автомобиля не следует сразу же снимать малярный скотч с поверхностей не предназначенных для покраски, поскольку еще не высохшая краска может подтечь на открытую поверхность. Следует дать подсохнуть эмали 10-15 минут. После снятия молярного скотча необходимо проверить, не попала ли эмаль на участки, не подлежащие покраске. При их обнаружении, свежую краску будет легко удалить с помощью ветоши смоченной слегка смоченной растворителем.

Теперь автомобиль можно оставлять на сушку. Краска полностью высыхает при нормальных условиях за 1-2 суток. Горячая сушка автомобиля позволяет значительно сократить время выдерживания, однако требует наличия специального оборудования.

Если после покраски кузова автомобиля планируется еще покрытие лаком, то не рекомендуется пересушивать краску. Нельзя оставлять автомобиль непокрытый лаком на сутки, поскольку пересушенная эмаль негативно повлияет на силу связывания лака с окрашенной поверхностью.

Для того, чтобы покраска кузова автомобиля своими руками прошла удачно, необходимо не только внимательно изучить пособия и инструкции, но и осуществить несколько пробных покрасок на старых деталях. Потратив немного времени на обучение, вы сможете избежать временных и финансовых затрат на устранение возникших из-за неопытности ошибок.

4) Культивирование бактерий: условия, питательные среды (их классификация по целевому назначению). Принципы работы питательных сред. Культуральные свойства бактерий. Примеры.

6.Методы культивирования облигатных анаэробов. Способы создания бескислородных условий, применяемая аппаратура. Этапы выделения чистых культур облигатных анаэробов.

8 Методы идентификации бактерий, используемые для определения рода, вида. Методы внутривидовой дифференциации бактерий. Практическое применение.

10.Энергетический метаболизм бактерий. Особенности дыхания облигатных аэробов и облигатных анаэробов. Брожение: типы брожения, примеры бактерий.

11. Понятие о стерилизации и дезинфекции. Методы термической стерилизации, их характеристика, применяемая аппаратура. Приведите примеры стерилизуемых материалов, инструментов.

16.Множественная лекарственная устойчивость. Блрс(бета-лактамазы расширенного спектра).Пути преодоления(ингибиторы бета-лактамаз,примеры защищ.Пенициллинов и цефалоспоринов.

Вопрос 1

2. Бактериофаги. Распространение фагов в природе. Умеренные бактериофаги, особенности их взаимодействия с клеткой. Лизогения, ее значение. Фаговая конверсия.

3.Отличительные свойства бактериофагов как представителей царства Vira. Вирулентные фаги, стадии взаимодействия с бактериальной клеткой. Практическое применение бактериофагов

5.Генотип и фенотип бактерий. Понятие о гене. Современное представление о генетическом аппарате бактерий. Бактериальная хромосома и плазмиды, транспозоны, Is-элементы.

7. Мутации у бактерий. Характеристика типов мутаций. Спонтанные и индуцированные мутации, механизмы возникновения, значение мутаций

Вопрос 1. Микрофлора тела человека. Микробные биоценозы. Причины изменения качественно-количественного состава микробиоценозов. Функции. Способы коррекции микробиоценозов

Вопрос 2. Микроэкология человека. Качественно-количественный состав микробиоты толстого кишечника у детей и взрослых, роль в норме и патологии. Функции нормальной микрофлоры

Вопрос 3. Микроэкология тела человека. Формирование микрофлоры новорожденных детей. Влияние механизма родов, типа вскармливания на состав микрофлоры ребенка первого года жизни.

Вопрос 4. Микрофлора отдельных экологических ниш здорового человека: кожи, дыхательных путей, мочеполовых путей. Роль нормальной микрофлоры в жизнедеятельности человека.(см.Выше)

Вопрос 5. Факторы, оказывающие влияние на количественный и видовой состав микрофлоры человека. Современные методы изучения микробиоты. Охарактеризуйте биопрепараты: пробиотики, пребиотики, синбиотики.

4. Врождённый иммунитет(см.Выше). Гуморальные факторы защиты: примеры, биологические свойства, механизмы действия. Значение.

5. Факторы врождённого иммунитета. Система комплемента, пути активации комплемента, биологические функции.

8. Клеточный адаптивный иммунный ответ. Формы проявления. Цитотоксическая реакция т-лимфоцитов: условия возникновения, основные факторы. Динамика реакции иммунного ответа.

11. Инфекционная аллергия. Аллергены. Практическое использование кожных аллергических проб в диагностике инфекционных заболеваний. Примеры. Механизм действия кожно-аллергической реакции IV типа.

12. Антигены: химическая природа и свойства, условия иммуногенности. Антигены бактериальной клетки, их химическая природа, свойства.

13. Антигены бактериальной клетки: локализация, химическая природа. Подразделение антигенов. Групповые, видовые, типовые антигены. Протективные антигены. Суперантигены. Антигенная мимикрия.

19.Серологические реакции, используемые в инфекционной иммунологии. Реакция непрямой гемагглютинации (рнга), ингредиенты, механизм, цель, понятие о титре. Практическое применение.

20.Серологические реакции,используемые в инфекционной иммунологии.Реакция преципитации:ингредиенты сущность постановка. Практическое применение

25.Серологические реакции,применяемые в инфекционной иммунологии.(см.20)Иммуноблотинг, радиоиммунологический анализ:спецефичность,чувствительность,механизмы реакции.Практическое использование.

28. Вакцинация. Эффективность вакцинации. Национальный календарь прививок рф: цель проведения вакцинации детей и подростков, характеристика вакцин.

29. Анатоксины: свойства, принцип получения, единицы измерения. Ассоциированные вакцины, их свойства, примеры. Охарактеризуйте иммунитет, формируемый в результате введения ассоциированных вакцин.

31. Диагностические сыворотки, их подразделение, получение и практическое применение. Моноклональные антитела. Гибридомы, их использование для получения моноклональных антител.

13.Реакция нейтрализации вирусов как один из основных методов,применяемых в диагностике вирусных инфекций.Сущность методы постановки.

14.Методы индикации и идентификации вирусов.Реакция гемагглютинации вирусов (рга) и реакция торможения торможения гемагглютинации,сущность практическое применение.

15.Культуры клеток:применение культур в диагностике вирусных заболеваний.Цитопатическое действие вирусов на клетки,формы проявления цпд,реакция нейтрализации цпд. Практическое применение.

Вопрос 5. Простые и сложные методы окраски. Подразделение сложных методов окраски по назначению. Протравы и дифференцирующие вещества. Метод Грама: сущность, этапы окраски, практическое применение.

Ответ: Простой метод окраски является одноэтапным (1 краситель –анилиновые, фуксин, генцианвиолет, метиленовый синий в виде растворов или пропитанных бумажек). Окраска 3-5 минут, промывание, высушивание, микроскопия. Можно получить представление о форме, размерах, расположении (но не о деталях строения).

Сложные

Дифференциальные - позволяющие отличить один вид или группу бактерий от других (по Грамму – характер клеточной стенки, метод Циля-Нильсена - кислотоустойчивые).

Протравы - химические и физические вещества, повышающие окрашиваемость микроорганизмов. Уплотняют цитоплазму и делают окраску более прочной, либо разрыхляют клеточную стенку и способствуют проникновению краски в клетку (раствор Люголя в методе Грама, карболовая кислота в методе Циля-Нильсена)

Дифференцирующие вещества избирательно обесцвечивают одни виды или структуры бактериальных клеток и не обесцвечивают другие

(спирт в методе Грама, серная кислота в методе Циля-Нильсена и Ожешко).

Окраска по Грамму.

цель метода	Выявление грамположительных и грамотрицательных бактерий
основной краситель	карболовый раствор генцианвиолета
протрава	раствор Люголя (после окрашивания)
дифференцирующее вещество
дополнительный краситель	разбавленный карболовый раствор фуксина
	в пламени спиртовки до окрашивания
этапы окраски	Окрасить раствором генцианвиолета 1 мин. (или с бумажкой – 3 мин.); Нанести на мазок раствор Люголя – 1 мин.; Промыть в этаноле 30 сек.; Промыть водой; Окрасить раствором фуксина 1 мин. (или с бумажкой – 5 мин.); Промыть водой; Высушить
сущность метода	Генцианвиолет образует комплекс с тейхоевыми кислотами в присутствии Люголя, который задерживается многослойным пептидогликаном у грамположительных бактерий. При дополнительной окраске фуксином грамотрицательные бактерии приобретают красный цвет.

1. Вопрос 6. Сложные методы окраски, протравы и дифференцирующие вещества. Метод Циля-Нильсена: сущность, этапы окраски, практическое применение.

Ответ: Сложные методы многоэтапные, различные красители, протравы, дифференцирующие вещества. Сложные методы бывают:

Дифференциальные (отличить группы (по Грамму - характер клеточной стенки, метод Циля-Нильсена -кислотоустойчивые).

Предназначенные для выявления различных структур (споры- Ожешки, включения волютина-Нейссера, капсула- Бурри-Гинса).

Протравы - химические и физические вещества, повышающие окрашиваемость микроорганизмов. Уплотняют цитоплазму и делают

окраску более прочной, либо разрыхляют клеточную стенку и способствуют проникновению краски в клетку (раствор Люголя в методе Грама, карболовая кислота в методе Циля-Нильсена)

Дифференцирующие вещества - вещества избирательно обесцвечивают одни виды или структуры бактериальных клеток и не обесцвечивают другие (спирт в методе Грама, серная кислота в методе Циля-Нильсена и Ожешко).

Метод Циля-Нильсона:

цель метода	Выявление кислотоустойчивых и некислотоустойчивых бактерий
основной краситель	карболовый раствор фуксина
протрава	карболовая кислота (в момент окрашивания)
дифференцирующее вещество	серная кислота
дополнительный краситель	водный раствор метиленового синего
способ фиксации препарата-мазка	в пламени спиртовки в процессе окраски
этапы окраски	Окрашивать карболовым раствором фуксина (фуксин Циля) через фильтровальную бумажку при осторожном нагревании над пламенем спиртовки 3 раза до появления паров белого цвета (1); Промыть в 5% серной кислоте; Промыть водой; Окрасить раствором метиленового синего 1 мин.; Промыть водой; Высушить
сущность метода	При частичном гидролизе клеточной стенки фуксин взаимодействует с миколовыми кислотами и образует комплекс в присутствии фенола. Фенол разрыхляет бактериальную оболочку и краска проникает внутрь клетки. Кислотоустойчивые -красные, некислотоустойчивые - синие

Практическое применение : для диагностики заболеваний (туберкулез)

Вопрос 7. Клеточная стенка бактерий: особенности строения у грамположительных и грамотрицательных бактерий, функции, методы выявления. Особенности строения клеточной стенки кислотоустойчивых бактерий. L -формы бактерий.

Ответ:

Клеточная стенка. Располагается над ЦПМ.

КС обеспечивает постоянную форму клетки, механическую и осмотическую защиту, взаимосвязь с окружающей средой, несет рецепторы для бактериофагов.

Отдельные соединения в составе КС обладают целым спектром иммунобиологических свойств : участвуют в адгезии, угнетении фагоцитоза, обладают иммуномодулирующей активностью и т.д.

Химический состав и строение клеточной стенки постоянны и являются важным таксономическим признаком.

В зависимости от строения клеточной стенки прокариоты, относящиеся к эубактериям, делятся на две большие группы: грамположительные и грамотрицательные бактерии.

Основа -пептидогликан , обеспечивающий ригидность и эластичность КС.

Структура: N-ацетилглюкозамина и N-ацетилмурамовой кислоты, соединенных между собой посредством гликозидных связей.

К каждому остатку N-ацетилмурамовой кислоты присоединен короткий пептид из 4-5 аминокислот.

Две особенности пептидного хвоста заслуживают внимания: наличие аминокислот в D-форме (неприродная конфигурация) и высокое содержание аминокислот с двумя аминогруппами. Это имеет принципиальное значение для пространственной организации пептидогликана. Обе аминогруппы этих аминокислот могут участвовать в образовании пептидных связей.

У грамположительных эубактерий он составляет основную массу вещества клеточной стенки (от 40 до 90%), у грамотрицательных - содержание пептидогликана значительно меньше (1-10%).

Функции клеточной стенки:

Обусловливает форму клетки.

Защищает клетку от механических повреждений извне и выдерживает значительное внутреннее давление.

Обладает свойством полупроницаемости, поэтому через нее избирательно проникают из среды питательные вещества.

Несет на своей поверхности рецепторы для бактериофагов и различных химических веществ.

Особенности строения КС Гр+

Клеточная стенка грамположительных бактерий достаточно плотно прилегает к ЦПМ.

Пептидные сшивки в пептидогликане обеспечивают его трехмерную пространственную организацию.

Многослойный пептидогликан пронизывают тейхоевые кислоты – полифосфатные соединения на основе рибитола или глицерина.

Тейхоевые кислоты ковалентно могут соединяться с N-ацетилмурамовой кислотой (собственно тейхоевые или стеночные) или с гликолипидом ЦПМ (липотейхоевые).

Свободные гидроксилы фосфорной кислоты придают тейхоевой кислоте свойства полианиона, определяющего поверхностный заряд клетки.

Особенности строения КС Гр-

Пептидогликан образует только тонкий внутренний слой клеточной стенки, неплотно прилегающий к ЦПМ.

У большинства видов пептидогликан образует одно- или двухслойную структуру, характеризующуюся весьма редкими поперечными связями между гетерополимерными цепями.

Снаружи от пептидогликана располагается дополнительный слой клеточной стенки - наружная мембрана. Она состоит из фосфолипидов, типичных для элементарных мембран, белков, липопротеина и липополисахарида (ЛПС).

ЛПС сложного молекулярного строения, занимает около 30-40% поверхности наружной мембраны и является ее важнейшим компонентом.

Методом выявления клеточной стенки является метод Пешкова (КС –красная; цитоплазма –розовая), по Грамму-тип стоения клеточной стенки.

Метод выявления клеточной стенки: Метод Пешкова

Этапы окраски :

1.мазок протравливать в 10% растворе танина 6-8 мин

2.промыть водой

3.окрашивать водным раствором фуксина 30-60 сек

4.высушить

Сущность метода : танин уплотняет клеточную стенку бактерий, и большая часть фуксина задерживается в ней

Цель : выявление клеточной стенки. КС - красная, цитоплазма -розовая

Особенности клеточной стенки кислотоустойчивых бактерий

Клеточная стенка кислотоустойчивых бактерий содержит большое количество липидов и восков, делающих их устойчивыми к последующему после окрашивания обесцвечиванию кислотами, щелочами или этанолом (например, виды Mycobacterium или Nocardia). Для их окраски применяют метод Циля-Нильсена .

L-формы

Если бактерии частично или полностью утратили клеточную стенку, но сохранили способность к размножению, они называются L-формами.

L-формы бактерий образуются под воздействием препаратов, ингибирующих синтез пептидогликана (антибиотик пенициллин) или разрушающих пептидогликан (лизоцим).

Изучают L-формы в фазово-контрастном микроскопе

Воспрос 8. Капсула бактерий: химическая природа, строение, функции, значение. Методы выявления капсул. Примеры инкапсулированных бактерий.

Капсула бактерий располагается поверх клеточной стенки. Она защищает бактериальную клетку во внешней среде от механического повреждения, высыхания, ядовитых веществ, бактериофагов, фагоцитов(в инфицированном организме). Выявление: в мазках-отпечатках из органов зараженных животных(простой метод, метод Грама). Тела бактерий окрашены на фоне окрасившейся ткани органа,окружены белым ореолом капсулы(капсула не окрашивается). Метод Бурри-Гинса (для окраски чистой культуры капсульных бактерий).

Метод выявления капсул: метод Бурри-Гинса

Цель метода : выявление капсулы у бактерий

Этапы окраски :

1.в каплю туши добавить каплю жидкости с микроорганизмами и растереть тонким слоем как мазок крови

2.высушить и зафиксировать в пламени горелки

3.окрасить карболовым фуксином 1мин

4.высушить

Сущность метода : капсула не окрашивается, задерживает тушь на поверхности, а фуксин окрашивает бактериальную клетку

Пример инкапсулированных бактерий : Klebsiella pneumoniae , Bacillus cereus

Воспрос 9. Жгутики у бактерий: строение, типы расположения, функции, способы выявления. Ворсинки: фимбрии, пили, подразделение, строение, функции. Примеры бактерий.

Жгутики являются органами движениями, представляют собой нитевидные придатки,состоят из белка флагеллина; прикрепляется к бакт.клетке с помощью базального тельца(система дисков и крючка, к которому прикреплена жгутиковая нить). Монотрихи (один жгутик),перитрихи (жгутики по всей поверхности бакт клетки), лофотрихи (пучок жгутиков на одном конце клетки), амфитрихи (единичные жгутики или пучки на разных полюсах клетки). Способы выявления: метод серебрения(жгутики искусственно утолщаются и становятся видимыми в иммерсионном микроскопе); наличие жгутиков определяется по активной подвижности микробных клеток.

Ворсинки(фимбрии и пили) состоят из белка пилина, видны только в электронном микросопе(тонкие и короткие). F -пили (половые, обеспечивают конъюгацию междубактериями);фимбрии общего порядка (адгезия).

Примеры бактерий: Половые пили Е. соli

Salmonella Typhi - перитрихи

Vibrio cholerae - монотрихи

Campylobacter jejuni - лофотрихи или амфитрихи

Воспрос 10. Споры бактерий: типы расположения спор в клетке, строение споры. Причины устойчивости спор к воздействию факторов внешней среды. Методы выявления спор. Примеры спорообразующих бактерий.

Эндоспора- являются приспособлением бактерий для сохранения вида в неблагоприятных условиях внешней среды. В одной бактериальной клетке образуется только одна спора! Такой способностью обладают бактерии рода Bacillus и Clostridium . (Bacillus – центральное расположение спор, не превышают поперечник клетки; Clostridium-крупные споры, субтерминально/терминально,в месте нахождения споры клетка раздувается, приобретая веретенообразную форму).Высокая резистентность ,причины: низкое содержание свободной воды, высокое содержание кальция,наличие дипиколиновой кислоты и белка, богатого цистеином,наличие нескольких оболочек). Окрашивание спор-метод Ожешки.(на высушенный мазок наложить фильтовальную бумажку, налить 0,5% раствор соляной кислоты и нагревать над пламенем спиртовки до появления пара 3 раза;далее окрашивать по Цилю- Нильсену.(Вегетативные клетки в готовом мазке-голубого цвета,споры-рубиново-красные).

Воспрос 11. Ультраструктура бактериальной клетки. Строение цитоплазматической мембраны, функции, методы выявления. Особенности строения наружной мембраны грамотрицательных бактерий.

ЦМП-основной барьер,который ограничивает протопласт бактерий,выявляется только в электронном микроскопе;состоит из двойного слоя фосфолипидов,куда включены интегральные и неинтегральные белки;от мембраны эукариот отличается отсутствием стеролов.

Функции : участвует в процессах избирательного активного транспорта молекул из внешней среды, является осмотическим барьером и осмотическим мостиком, выделяет гидролитические ферменты, в ее состав входят ферменты электрнонно-транспортной цепи,с ней связана АТФ-аза, содержит ферменты комплекса репликации ДНК нуклеоида,в ней фиксируются жгутики и ворсинки,имеет ферментный аппарат,участвующий в синтезе своих собственных структур, клеточной стенки.

Мезосомы - инвагинации ЦПМ внутрь клетки. Играют роль в репликации хромосомы и ее последующем расхождении по дочерним клеткам, разграничивает внутреннее содержимое на отсеки. Мезосомы грамотрицательных бактерий-простые инвагинации, грамположительных имеют сложную морфологию (везикулярные,трубчатые,пластинчатые).

Наружная мембрана грамотрицательных бактерий связана посредством липопротеина с подлежащим тонким слоем пептидогликана; внутренний компонент-фосфолипидный бислой, в наружном расположен липополисахарид (является О-антигеном, состоит из: липида А-консервативная структура; ядра, или стержневой, коровой части-олигосахаридная структура; высоковариабельного О-специфического олигосахарида). Белки- порины пронизывают мембрану, образуя гидрофильные поры, также являются рецепторами для бактериофагов.(из учебника)

Воспрос 12. Ультраструктура бактериальной клетки. Рибосомы: строение рибосом у прокариот, функции. Отличия в строении рибосом эукариотических клеток. Цитоплазматические включения у бактерий: химическая природа, функции, способы выявления, значение.

Рибосомы прокариот имеют константу седиментации 70 S. Они построены из двух частиц: 30 S (малая субъединица) и 50 S (большая субъединица). S - это коэффициент седиментации, который характеризует скорость перемещения молекул или частиц в центробежном поле при центрифугировании. Рибосомы рассеяны по всей цитоплазме

В клетке эукариот имеют 80S рибосомы прикреплены к эндоплазматическому ретикулуму. Функция: синтез белков

Включения- зерна волютина,содержащие поли- и мета-фосфаты. (Corynebacterium diphtheria). Окрашиваются простым методом Леффлера(окраска фиксированного в пламени горелки мазка щелочным мителеновым синим 5 мин. Тела бактерий-голубые,зерна волютина- темно-синие ) и сложным методом Нейссера (фиксированный в пламени горелки мазок окрашивают уксусно-кислой синькой в течении 1 минуты,промывают водой,протравливают раствором Люголя 30 скекунд и докрашивают везувином. Препарат промывают водой, высушивают, микроскопируют. Тела бактерий-желтые , зерна волютина- темно-синий цвет , расположены на обоих концах клетки) .

Воспрос 13. Ультраструктура бактериальной клетки. Нуклеоид бактерий: строение, функции и методы выявления. Особенности организации генетического аппарата прокариот и эукариот.

Нуклеоид у прокариот - генетический аппарат бактерий не имеет ядерной оболочки и представлен одной кольцевой двунитевой суперспирализованной молекулой ДНК,которая является хромосомой; располагается в цитоплазме,не содержит белков гистонов. Не способен к митозу

Генетический аппарат всех эукариот находится в ядре и защищён ядерной оболочкой.ДНК эукариот линейная. Хромосомы как структуры. Содержит белки-гистоны. Способен к митозу

Выявляют при электронной микроскопии, Романовского- Гимзы.

метод Романовского-Гимзы

Цель метода : выявление нуклеоида; нуклеоид - сине-фиолетовый; цитоплазма - розовая

Сущность метода : Амур и метиленовый синий окрашивает участки клетки со слабощелочным pH , эозин с кислым

Этапы окраски :

1.провести кислотный гидролиз в растворе соляной кислоты при нагревании

2.промыть водой

3.окрашивать краской Романовского-Гимзы 40-60 мин

4.высушить

14. Актиномицеты : морфология чистой культуры и структура друзы актиномицетов. Методы изучения. Роль в инфекционной патологии человека.

Актиномицеты - группа нитчатых грамположительных прокариот. Виды актиномицет представляют собой тонкие неспорообразующие полиморфные палочки и нити(гифы) с ветвлением; гифы переплетаясь, образуют мицелий.

Актиномицет у здорового человека обитают в полости рта и кишечном тракте, не причиняя ему вреда, но снижение иммунитета организма может вызвать заболевание - актиномикоз (развиваются гнойные хронические процессы с поражением любых органов и тканей).

В пораженном организме актиномицеты образуют друзы , имеющие звездчатую, лучистую форму. Центр друзы состоит из компактного кальцинированного плотного мицелия, а периферийные гифы покрыты капсулоподобными эозинофильными чехлами, выполняющими защитную функцию.

Для изучения актиномицет применяют методы Грама и Циля-Нильсена

15. Микоплазмы : таксономия, строение клетки, особенности морфологии, биологические свойства, методы культивирования и выявления. Роль в инфекционной патологии человека.

Ответ : Класс - Mollicutes

Порядок - Mycoplasmatales

Семейство - Mycoplasmataceae

Род - Mycoplasma

Микоплазмы - полиморфные микроорганизмы, отличающиеся от других прокариотов отсутствием клеточной стенки

Поверхностной оболочкой микоплазм является цитоплазматическая мембрана, более прочная и эластичная (т.к. в ней присутствует холестерин). Клетки микоплазм содержат нуклеоид(самый маленький), рибосомы, цитоплазму и цпм (без мезосом). У некоторых микоплазм обнаружены микроворсинки (Mycoplasma pneumoniae) и нитчатые выросты различной длины, которые принимают участие в скользящем движении клеток и адгезии.

Для культивирования микоплазм используют специальные полужидкие среды , на которых через 2-4 недели получают видимый рост в виде колоний, напоминающий "яичницу- глазунью"(из-за хрупкости микоплазм - т.к. Отсутствует клеточная стенка).Их изучают в нативных препаратах в фазово-контрастном микроскопе (не удается окрасить из-за хрупкости)

16. Риккетсии : таксономия, биологические свойства, морфологические формы, методы окраски, методы культивирования. Жизненный цикл риккетсий. Роль риккетсий в патологии человека (назовите заболевания и соответствующих им возбудителей).

Ответ : Царство - Bacteria

Порядок - Rickettsiales

Семейство - Rickettsiaceae

Род - Rickettsia

Риккетсии - грамотрицательные полиморфные бактериоподобные прокариоты,капсул,спор не образуют. Облигатные внутриклеточные бактерии, которые не растут на простых питательных средах. Жизненный цикл риккетсий включет 2 стадии - вегетативную и покоящуюся . В вегетативной стадии риккетсии активно размножаются путем бинарного деления; покоящаяся форма обладает повышенной резистентностью(меньших размеров, с утолщенной клеточной стенкой).

Различают 4 морфологические формы риккетсий (по Здродовскому ) :

Кокковидную (d= 0,3-0,4мкм)

Палочкивидную (1-2 мкм)

Бациллярную(3-5 мкм)

Нитевидную(до 40 мкм)

Риккетсии культивируются в желточных мешках куриных эмбрионов, перевиваемых культурах клеток, легких белых мышей. Риккетсии можно культивировать путем инфицирования ими переносчиков возбудителей инфекций - вшей, блох, клещей. Для окраски риккетсий применяют сложные методы - Романовского-Гимзы и Здродовкого

Методика окраски :

1.фиксированный в пламени горелки мазок окрашивают разведенным карболовым фуксином Циля(без нагревания)

2.промывают водой

3.обесцвечивают слабым раствором органической 0,5% лимонной к-ты, 0,15% уксусной к-ты или минеральной кислоты (0,01% HCL)

4.промывают водой и докрашивают водным раствором метиленового синего

Результат окраски : риккетсии - в рубиново-красный; цитоплазма - голубая; ядро - синее

Патогенные для человека риккетсии являются возбудители риккетсиозов, для которых характерны сыпнотифозные или пятнистые лихорадки. Например, Rickettsia prowazekii вызывает эпидемический вшивый сыпной тиф.

17. Хламидии : таксономия, морфология и ультраструктура, жизненный цикл. Методы выявления и культивирования. Роль в инфекционной патологии человека.

Ответ : Семейство - Chlamydiaceae

Род - Chlamydia

ЭТ - внеклеточная инфекционная частица (0,2-0,4 мкм), содержит компактный нуклеоид, рибосомы, жесткую клеточную стенку. ЭТ проникает в чувствительную клетку путем эндоцитоза, вокруг него образуется вакуоль. Внутри вакуоли ЭТ разбухает, приобретает сетчатую структуру, увеличивается до 0,5-1,5 мкм и превращается в РТ.

РТ внутри вакуоли многократно делится путем образование поперечных перегородок. Вакуоль заполняется микро-колониями хламидий, содержащих большое количество РТ в процессе деления, промежуточные тельца и ЭТ. Вакуоль превращается во внутриклеточное включение, покрытое оболочкой - хламидой, расположенное в цитоплазме клетки-хозяина. Выход хламидий из клетки - через неповрежденную мембрану или при гибели клетки. Освободившиеся ЭТ внедряются в другие здоровые клетки, где цикл развития повторяется.

Изучают хламидии в живом состоянии, в фазово-контрастном микроскопе и окрашивают методом Романовского-Гимзы (ЭТ - розовые, РТ - сине-голубые).

Патогенны: Chlamydia trachomatis (трахома и урогенитальные инфекции), Chlamydia pneumoniae (респираторные инфекции), Chlamydia psittaci (орнитоз).

18. Спирохеты : таксономия, биологические свойства, ультраструктура клетки, цисты. Методы изучения спирохет нативных и окрашенных препаратов. Роль спирохет в инфекционной патологии человека.

Семейство – Spirochaetaceae

Спирохеты - тонкие нитевидные, спирально извитые микроорганизмы, обладающие активной подвижностью. Относятся к грамотрицательным прокариотам. Клеточная стенка эластичная, что позволяет им совершать колебательные, вращательные и сгибательные движения.

Двигательный аппарат представляет собой фибриллярный тяж, состоящий из 2х пучков фибрилл, расположенных субтерминально на обоих концах клетки. Фибриллы пролегают в клеточной стенке, обвивая цитоплазматический цилиндр (протопласт). В середине клетки фибриллы перекрывают друг друга. Фибриллы состоят из белка флагеллина.

Спирохеты изучают в нативных препаратах, используя темно-польную микроскопию для выявления их форм и подвижности. Их Ультраструктуру изучают с помощью электронной микроскопии. Для изучения спирохет в окрашенном состоянии применяют: метод Романовского-Гимзы (боррелии в сине-фиолетовый, трепонемы в бледно-розовый, лептоспиры в красно-розовый), метод серебрения по Морозову (спирохеты имеют вид тесно-коричневых спиралей на светло-желтом фоне препарате),негативный способ Бурри (тушь не проникает тела микробов,на темном фоне белые контуры спирохет)

существенную роль в инфекционной патологии человека играют роды Treponema, Borrelia и Leptospira. Treponema pallidum - возбудитель сифилиса, Borrelia recurrentis - возбудитель возвратного тифа, Leptospira interrogans является возбудителем лептоспироза

19. Микроскопические грибы : морфология, ультраструктура. Размножение плесневых и дрожжевых грибов. Методы изучения. Роль в инфекционной патологии человека.

Протопласты (содержимое клетки, заключенное в клеточную стенку) клетки грибов содержат ядро с ядрышком, митохондрии, лизосомы, эндоплазматический ретикулум, рибосомы, фагосомы, вакуоли и др. Снаружи протопласты покрыты ЦПМ с высоким содержанием стеролов (главным образом эргостерола) и плотной клеточной стенкой,в состав которой входят хитин, целлюлоза, глюкуроновая кислота, глюканы, различные углеводы, липиды, белки, пигменты.

По морфологическим особенностям грибы подразделяются на группы: плесневые грибы и дрожжеподобные грибы

Плесневые грибы образуют мицелий (тело гриба), который состоит из переплетенных гифов. На питательной среде плесневые грибы образуют субстратный мицелий, который прорастает в нее, извлекая из среды все необходимые для роста и размножения вещества, и воздушный мицелий,на котором созревают неполовые споры,с помощью которых грибы размножаются. Бесполовой путь у плесневых грибов характеризуется образованием большого количества экзоспор или эндоспор. Многие грибы могут размножаться и половыми спорами(половым путем).

Дрожжевые грибы размножаются почкованием.

Морфологию грибов изучают в нативных препаратах "раздавленная капля" в затемненном поле зрения, фазово-контрастном и люминесцентном микроскопе и с помощью окраски простым методом, по Граму, Цилю-Нильсену,Нейссеру

Заболевания вызываемые микроскопическими грибами - микозы.Грибковое заболевание Кандидоз - вызывается Candida albicans

РАЗДЕЛ ФИЗИОЛОГИЯ.

Методы окраски

4. Промыть водой

Механизм и этапы окраски по Цилю-Нельсону

1. На фиксированный мазок нанести карболовый р-р фуксина через полоску фильтровальной бумаги и подогреть до появления паров в течении 3-5 мин

2. Снять бумагу, провыть мазок водой

3. Нанести 5% р-р серной кислоты или 3% р-р смеси спирта с хлороводородной кислотой на 1-2 мин для обесцвечивания.

4. Промыть водой

5. Докрасить мазок водным р-ом метиленового синего в течении 3-5 мин

6. Промыть водой, высушить и микроскопировать

* Некислоустойчивые – обесцвечиваются и окр. метиленовым синим в голубой цвет, а кислоустойчивые остаются окрашенными фуксином в красный.

Метод Ожешко

Относится к сложным методам окраски и используется для выявления спор бактерий.

Этапы окраски:

1. На нефиксированный мазок нанести 0,5% раствор хлористоводородной кислоты и подогреть в течение 2-3 мин на пламени (для протравливания плотной оболочки споры) до полного испарения кислоты.

2. Высушить и зафиксировать мазок в пламени горелки.

3. Окрасить по методу Циля-Нильсена.

Споры бактерий будут окрашиваться в красный цвет (как кислотоустойчивые бактерии), а вегетативные формы в синий цвет (как некислотоустойчивые бактерии).

Окраска по Гиссу

Техника. Препарат, фиксированный любым спосо­бом, кроме жара, красят 5% водным раствором генцианового фиолетового, подогревая до появления паров. Мазок промывают 20% водным раствором медного купороса и сушат.

Микроскопическая картина. Бактерии и капсулы окрашиваются в фиолетовый цвет различной интенсивности.

Требования предъявляемые к петельным средам

Готовые питательные среды должны:

1. удовлетворять потребностям обмена веществ микробной клетки;

2. легко усваиваться бактериями;

4. быть стерильными;

5. иметь оптимальную рН;

6. иметь достаточную влажность (плотная среда должна иметь не меньше 60% влаги);

Классификация питательных сред

По составу питательные среды подразделяются на естественные, искусственные и синтетические.

Естественные среды состоят из натуральных продуктов животного или растительного происхождения. Основой таких сред являются молоко, яйца, овощи, животные ткани, желчь, сыворотка крови. На естественных средах хорошо развиваются многие микроорганизмы, так как в таких средах имеются все компоненты для их роста и размножения.

Синтетические среды – это такие среды, в состав которых входят только определенные, химически чистые соединения, взятые в точно указанных концентрациях. Синтетические среды могут иметь большой набор компонентов, но могут быть и простыми по составу. Эти среды удобны для исследования обмена веществ микроорганизмов. Зная точный состав и количество входящих в среду компонентов, можно изучить их потребление и превращения в соответствующие продукты обмена.

По консистенции среды бывают жидкие, полужидкие, плотные, сыпучие и сухие.

Жидкие среды применяют для изучения физиолого-биохимических особенностей микроорганизмов, для накопления биомассы или продуктов обмена микроорганизмов. Примером наиболее часто применяемой жидкой питательной среды является мясо-пептонный бульон (МПБ).

Для его приготовления сначала готовят мясной отвар. С этой целью свежее мясо (говядину, телятину) освобождают от костей и сухожилий, пропускают через мясорубку. 500 г такого фарша заливают 1 л водопроводной воды и оставляют на 24 часа для экстрагирования необходимых для питания микроорганизмов веществ. Затем мясо отжимают через марлю и полученный настой кипятят в течение 30 минут для свёртывания белка, который отделяют фильтрованием. Отфильтрованный настой стерилизуют. Стерильная мясная вода является основой для приготовления мясо-пептонного бульона. Для этого к 1 л мясной воды добавляют 10 г пептона и 5 г NaCl. Пептоны добавляют взамен свернувшегося белка. Они являются продуктами неполного разрушения белка, получаемыми кислотным или ферментативным гидролизом мяса или молочного казеина. Преимуществом этих источников аминокислот является то, что они легко усваиваются и при стерилизации не свёртываются. Поэтому стерильный бульон остаётся прозрачным.

Рост микроорганизмов в таких средах легко отмечается визуально по появлению мутности. МПБ – богатая питательная среда, но в ней мало углеводов.

Плотные среды необходимы для выделения и изучения свойств чистых культур микроорганизмов, так как на них можно получить изолированный рост отдельных клеток. Плотные питательные среды (мясо-пептонный агар (МПА)) готовят из жидких посредством добавления к ним агар-агара. Агар-агар (по малайски – желе) получают из водорослей. Это сложный полисахарид, который образует гель с точкой плавления 96 – 100 ºС и температурой застывания 40 ºС. Несколько циклов плавления и затвердевания не влияют на способность агара образовывать гель, поэтому агаровые среды можно несколько раз стерилизовать.

Плотные питательные среды получают, добавляя к жидким 1-2% агар-агара. Среду с внесённым в неё агаром нагревают на водяной бане до расплавления последнего. Полученный горячий раствор фильтруют через гигроскопическую вату и разливают по чашкам Петри и пробиркам.

Сухие питательные среды изготовляются в виде сухих порошков, которые хорошо растворяются в воде при комнатной температуре. Преимущество таких сред в их стандартности, стабильности, простоте приготовления и удобстве при транспортировке. Сухие питательные среды представляют собой гигроскопические порошки, хранящиеся в специальных флаконах. В лаборатории из порошков готовят соответствующие питательные среды по прописи указанной на этикетке. Чаще всего применяют сухой питательный агар, среду Эндо.

По назначению среды подразделяются на обычные (простые), специальные, элективные, дифференциально-диагностические.

Обычные (простые) среды используют для культивирования большинства микроорганизмов. Это мясо-пептонный бульон (МПБ), мясо-пептонный агар (МПА).

Специальные среды – это среды, предназначенные для выявления тех или иных микроорганизмов или получения культуры микроорганизмов, обладающих особыми свойствами.

Среди специальных сред различают:

1. элективные (избирательные)

2. дифференциально-диагностические (индикаторные) среды.

Элективные среды (от латинского слова electus – избираю) подобраны таким образом, чтобы обеспечить оптимальные условия для выращивания определённых микроорганизмов. В них могут быть добавлены вещества, избирательно подавляющие развитие сопутствующей микрофлоры. При посеве материала, содержащего смесь различных микроорганизмов, раньше всего проявляется рост того вида, для которого данная среда будет избирательно пригодна.

Сопутствующие микроорганизмы или совсем не растут на таких средах, или развитие их задерживается. Такие среды применяют для выделения микробов определённых видов из объектов, содержащих постороннюю микрофлору.

Например, холерный вибрион может развиваться в присутствии относительно высокой концентрации щелочи(1%), губительно действующей на сопутствующую. Дифтерийная палочка опережает по быстроте роста на свёрнутой кровяной сыворотке Лёффлера сопутствующую микрофлору зева.

Методика посева на искусственные питательные среды

Посев на плотную среду

Если необходимо произвести посев на твердую питательную среду, например на «косой агар», то материал наносят на поверхность среды при помощи легких зигзагообразных движений петли. В том случае, если производят посев анаэробов, делают укол иглой, зараженной микробами, в центральную часть среды, застывшей в виде столбика (рис. 57). Пробирку при этом держат в опрокинутом вверх дном положении или под углом, чтобы уменьшить опасность загрязнения среды из воздуха. Посев нужно делать именно уколом, а не разрывать поверхность среды и не касаться ее рукояткой иглы.

Метод истощающего штриха

В целях экономии сред и посуды можно пользоваться одной чашкой, разделив её на 4 сектора и последовательно засеяв штрихом. Для этого материал берут пет­лёй и проводят ею на расстоянии 5 мм друг от друга ряд параллельных штрихов сна­чала по поверхности первого сектора, а затем последовательно оставшимися на пет­ле клетками засевают все другие секторы. При каждом последующем штрихе про­исходит уменьшение количества засеваемых клеток. После рассева чашки перевора­чивают вверх дном, чтобы конденсационная вода, образовавшаяся на крышке чашки Петри, не мешала получить изолированные колонии. Чашки выдерживают в термостате 1-7 суток, так как скорость роста различных микроорга­низмов неодинакова.

Таким образом, в первых секторах получается сплошной рост, а вдоль после­дующих штрихов вырастают обособленные колонии, представляющие собой потом­ство одной клетки.

Метод прогревания

Позволяет отделить спорообразующие бациллы от неспоровых форм. Прогре­вают исследуемый материал на водяной бане при 80°С 10-15 минут. При этом поги­бают вегетативные формы, а споры сохраняются и при посеве на соответствующую питательную среду прорастают, образуя колонии только спорообразующих бакте­рий.

Метод обогащения

Исследуемый материал засевают на элективные питательные среды, способст­вующие росту определенного вида микроорганизмов.

Метод Шукевича

Применяется для выделения подвижных микроорганизмов. Исследуемый ма­териал засевают в конденсационную воду скошенного агара, находящегося в про­бирке. При размножении подвижные формы микробов из конденсационной воды распространяются по агару, как бы "вползают" на его поверхность. Из верхней час­ти роста производят высев в конденсационную воду свежей питательной среды. Производя таким образом несколько пересевов, в конце концов получают чистую культуру подвижной бактерии.

Метод ингибирования

Основан на различном действии некоторых химических веществ и антибиоти­ков на микроорганизмы. Определённые вещества угнетают рост одних микроорга­низмов и не оказывают влияния на другие. Например, небольшие концентрации пенициллина задерживают рост грамположительных микроорганизмов и не влияют на грамотрицательные.

Этап 1

А. Забор, транспортировка, хранение, предварительная обработка материала. Иногда до посева проводят селективную обработку материала с учетом свойств выделяемого микроорганизма. Например, перед исследованием мокроты или другого материала на присутствие кислотустойчивых микобактерий туберкулеза, материал обрабатывают растворами кислот или щелочей.

Б. Посев в среду обогащения (при необходимости).Его проводят, если в исследуемом материале содержится малое количество бактерий, например, при выделении гемокультуры. Для этого кровь, взятую на высоте лихорадки в большом объёме (8–10 мл у взрослых, 4–5 мл у детей) засевают в среду в соотношении 1:10 (для преодоления действия бактерицидных факторов крови); посев инкубируют при температуре 37 0 С 18-24 ч.

В. Микроскопия исследуемого материала. Из исследуемого материала готовят мазок, окрашивают его по Граму или другим методом и микроскопируют. Оценивают присутствующую микрофлору, ее количество. В ходе дальнейших исследований должны быть выделены микроорганизмы, присутствовавшие в первичном мазке.

Г. Посев на питательные среды с целью получения изолированных колоний. Производят посев материала петлёй или шпателем методом механического разобщения на чашку с дифференциально-диагностической или селективной средой с целью получения изолированных колоний. После посева чашку перевора­чивают дном кверху (чтобы избежать размазывания колоний капельками конденсационной жидкости), подписывают и помещают в термостат при температуре 37 0 С на 18-24 ч.

Этап 2

А. Изучение морфотипов колоний на средах, их микроскопия. Просматривают чашки и отмечают оптимальную питательную среду, скорость роста, характер роста микроорганизмов. Для изучения выбираютизолированные колонии, расположенные по ходу штриха, ближе к центру. Если вырастает несколько типов колоний – каждый исследуется в отдельности. Оценивают признаки колоний (табл. 7). При необходимости чашки с посевамипросматривают через лупу или с помощью микроскопа с объективом малого увеличения и суженной диафрагмой. Изучают тинкториальные свойства отличающихся морфотипов колоний, для этого из части исследуемой колонии готовят мазок, окрашивают по Граму или другими методами, микроскопируют и определяют морфологию чистоту культуры.При необходимости ставят ориентировочную РА на стекле с поливалентными сыворотками.

Б. Накопление чистой культуры. Для накопления чистой культуры изолированные колонии всех морфотипов пересевают в отдельные пробирки со скошенным агаром или какой-либо другой питательной средой и инкубируют в термостате при +37 0 С (такая температура оптимальна для большинства микроорганизмов, но может быть и другой, например, для Campylobacterium spp. – +42 0 C, Candida spp. и Yersinia pestis – +25 0 C).

В качестве среды накопления для энтеробактерий обычно используют среду Клиглера.

Состав среды Клиглера: МПА, 0,1% глюкозы, 1% лактозы, реактив на сероводород (сернокислое железо + тиосульфат натрия + сульфит натрия), индикатор феноловый красный. Изначальный цвет среды малиново-красный, среда «скошена» в пробирках: имеет столбик (2/3) и скошенную поверхность (1/3).

Посев в среду Клиглера производится штрихом по поверхности и уколом в столбик.

Этап 3.

А. Учет роста на среде накопления, оценка чистоты культуры в мазке по Граму.Отмечают характер роста выделенной чистой культуры. Визуально чистая культура характеризуется однородным ростом. При микроскопическом исследовании окрашенного мазка, приготовленного из такой культуры, в нём в разных полях зрения обнару­живаются морфологически и тинкториально однородные клетки. Однако в случае выраженного плеоморфизма, присущего неко­торым видам бактерий, в мазках из чистой культуры могут встречаться одновременно клетки с различной морфологией.

Если в качестве среды накопления использовали индикаторную среду Клиглера, то оценивают изменения ее цвета в столбике и скошенной части, по которым определяют биохимические свойства: ферментацию глюкозы, лактозы и продукцию сероводорода. При разложении лактозы желтеет скошенная часть среды, при разложении глюкозы – желтеет столбик. При образовании CO 2 в процессе разложения сахаров образуются газовые пузырьки или разрыв столбика. В случае продукции сероводорода отмечается почернение по ходу укола из-за превращении сульфата железа в сульфид железа.

Характер изменения цвета среды Клиглера (рис. 23) объясняется неодинаковой интенсивностью расщепления микроорганизмами азотистых веществ и образования щелочных продуктов в аэробных (на скошенной поверхности) и анаэробных (в столбике) условиях.

В аэробных условиях на скошенной поверхности происходит более интенсивное щелочеобразование, чем в столбике среды. Поэтому при разложении глюкозы, присутствующей в среде в небольшом количестве, образующаяся на скошенной поверхности кислота быстро нейтрализуется. В то же время при разложении лактозы, присутствующей в среде в высокой концентрации, щелочные продукты не способны нейтрализовать кислоту.

В анаэробных условиях в столбике щелочные продукты образуются в ничтожном количестве, поэтому здесь выявляется ферментация глюкозы.

Б. Окончательная идентификация чистой культуры (определение систематического положения выделенного микроорганизма до уровня вида или варианта) и определение спектра чувствительности выделенной культуры к антибиотикам.

Для идентификации чистой культуры на этом этапе изучают биохимические, генетические, серологические и биологические признаки.

Методы окраски

Механизм и этапы окраски по Граму

1. На фиксированный мазок нанести карболово-спиртовой раствор генцианового фиолетового через полоску фильтровальной бумаги. Через 1-2 мин снять ее, а краситель слить.

2. Нанести раствор люголя на 1-2 мин (йод)

3. Обесцветить этиловым спиртом в течении 30-60 с до прекращения отхождения фиолетовых струек красителя.

4. Промыть водой

5. Докрасить водным р-ом фуксина в течении 1-2 мин, промыть водой, высушить и микроскопировать.

* Грамположительные бактерии окрашиваются в темно-фиолетовый цвет, грамотрицательные - в красный.

— ваш проводник в мире масштабного моделирования!

Вчера вечером, когда я начал выкладывать в свой аккаунт в Instagram фотографии первого этапа работ по модели F-18F Super Hornet от Академи, мне написал один из подписчиков. Он попросил меня рассказать о том, как наносить смывку, следы эксплуатации на модели бронетехники.

Прежде чем что-либо советовать, я ознакомился с уровнем его работ. И понял, что тут до собственно практики нанесения всех этих мудреных вещей далеко. Необходимо объяснить сам процесс работ над моделью. Дабы человек смог перейти от простой, одноцветной покраски к полному циклу работ.

Именно желание объяснить саму последовательность процесса стало основанием для написания этого материала.

Здесь я опишу структуру цикла работ над моделями бронетехники. Без влезания в подробности каждого этапа. Это вы, при желании, сможете сделать самостоятельно. Важно просто понять что и зачем идет.

Поэтому данный материал предназначен в первую очередь начинающим моделистам. Если вы выполните (даже слабо и плохо) все эти этапы в предлагаемой последовательности, вы добьетесь приемлемого результата. Останется только улучшать понимание каждого из этапов в частности.

Возможно, эта статья будет полезен и опытным. Хотя бы просто для того, чтобы взглянуть на процесс снаружи . Получить свежий взгляд.

В качестве основы визуального ряда я использовал процесс сборки модели БМП Т-15 на ТГП (тяжелой гусеничной платформе) Армата от фирмы Panda Hobby в масштабе 1/35.

СБОРКА МОДЕЛИ

Первым этапом идет собственно сборка модели.

Необходимо собрать модель как можно полнее. Если возникает вопрос в окраске катков и гусеничной ленты — можно сделать это на первоначальном этапе. Но не нужно излишне усердствовать. Не нужно красить элементы, которые после сборки не будут видны. Например, пространство под бортовыми экранами в верхней части гусениц.

ПРЕШЕЙДИНГ

Прешейдинг — это процесс создания темной цветовой основы для последующего заглубления цветов. В первую очередь, окрашиваются швы, элементы расшивки. И вообще все темные места. Т.е. те места, которые впоследствии создают цветовой перепад, и обеспечат зрительный объем.

Ведь если окрасить модель без предварительной подготовки, только с использованием базового цвета — модель останется плоской .

Прешейдинг может выполняться как в виде грунтования т.е. в качестве подготовки пластика в дальнейшим окрасочным работам. Например, с использованием цветного акрилового грунта. Так и в отдельности. По пластику, или же нанесенному по всей поверхности модели грунту.

ЦВЕТОВАЯ МОДУЛЯЦИЯ

Сегодня собственно процесс окрашивания перешел от простого нанесения цветов в плоскость полноценной художественной работы. Игры с цветами. Создания большого количества оттенков, создающих визуальный объем и красоту.

Основной метод, которым сейчас пользуются моделисты, называется цветомодуляция , или цветовая модуляция. Его смысл состоит в том, что наносится некая последовательность цветов от темного к светлому.

Это может быть и как смешивание разных цветов для каждого последующего слоя, так и использование специальных наборов цветомодуляции.

В данном случае мы имеем нанесение базового полупрозрачного слоя. Т.е. слой не перекрывает созданные на предыдущем слое темные зоны. А именно слегка накрывает их. Так создается первый визуальный объем.

Затем, путем добавления в базовый цвет более яркого тона, наносится второй, светлый полупрозрачный слой. Принципиально выбор количества слоев модуляции является решением только мастера. Если нужно, можно сделать хоть 10 таких высветлений.

Но на первоначальном этапе, когда вы только пробуете данный метод, вполне допустимо ограничиться и 2мя слоями.

Сразу стоит заметить, что окрашенная таким способом модель может выглядеть недопустимо ярко, карнавально. Но этого не нужно бояться. Эта яркость, под воздействием наложения эффектов эксплуатации уйдет, оставив за собой именно широкую гамму тонального перехода.

Цветовая модуляция

НАНЕСЕНИЕ КАМУФЛЯЖА

После выполнения всех предыдущих манипуляций можно с успехом переходить к собственно нанесению камуфляжного рисунка. Это делается путем создания окрасочных масок. Можно использовать и офисный пластилин, и специально созданные составы от AMMO MIG или Пластмастер.

После того, как границы камуфляжа первого слоя выложены, мы или закрываем не окрашиваемые места от возможного попадания краски. Например, фасовочными пакетами. Или же аккуратно, на небольшом давлении красим первый слой.

Принципиально, в окраске камуфляжного рисунка тоже можно использовать принцип цветомодуляции, последовательно нанося несколько высветляющих полупрозрачных слоев цвета.

Но здесь мы не будем себе усложнять работу.

И просто красим камуфляжный слой в 1 цвет. Только желательно сделать его полупрозрачным. Дабы создавать зоны тени, изменять визуальный вес и объем модели.

После нанесения 1го камуфляжного цвета мы выполняем всю последовательность действий снова. Но уже для того, чтобы нанести второй цвет.

Нанесение камуфляжного рисунка

НАНЕСЕНИЕ СЛЕДОВ ЭКСПЛУАТАЦИИ

Модель окрашена. Но это считай, что только первая половина работ сделана. Второй частью частью является процесс нанесения следов эксплуатации. Или по простому везеринг (от англ. weathering — опогаживание).

Вообще, эта тема для нескольких диссертаций как минимум. И в одной статье нет смысла даже пытаться рассматривать все элементы этого очень увлекательного процесса. Лучше взять подшивку журналов The Weathering Мигеля Хименеса, и посмотреть что же это такое.

Но раз уж мы взялись говорить о создании модели на базовом уровне на примере именно этой, конкретной модели, то все-таки стоит описать хотя бы простые элементы действий.

После окраски модель закрывается сатиновым (полуматовым) лаком. Если уж совсем припрет, то можно и матовым. Но уж никак не глянцевым.

Это позволит защитить акриловую краску от воздействия эмалевых жидкостей, применяемых для везеринга. Если не наложить лак, то агрессивная основа эмали попросту сожрет акрил.

В данном случае, первым этапом везеринга стала надувка через аэрограф песчаного тона. Больше в местах, где пыль и песок могут скапливаться. Меньше «по площадям».

Затем наносятся потеки грязи на вертикальные поверхности. Это, в первую очередь, бортовые экраны.

Как потеки грязи высохнут, следует приступать к нанесению следов брызг. Здесь мы используем кисть и аэрограф.

Если под рукой есть пигменты, можно пройтись и ими.

Везеринг в 3 этапа

РЕЗУЛЬТАТ

Для первого раза всех этих ритуальных действий танца с бубнами вполне достаточно.

Нужно не заморачиваться с каждым этапом в отдельности. А выполнить самую простую последовательность, получить первый результат. Это позволит хотя бы понять, что это такое.

И СДЕЛАТЬ ГОТОВУЮ МОДЕЛЬ.

Это я считаю наиболее важным. Доведение модели до готового результат. Можно навсегда увязнуть в дебрях какого-то этапа работ, так и не добравшись до конца.

Задача каждого моделиста состоит в эволюционном пути развития. Т.е. необходимо постепенно, шаг за шагом пробовать что-то ОДНО новое. Улучшать понимание какого-то ОДНОГО момента.

Конечный результат

И так, раз за разом, постепенно ваши модели обретут новые качества. А ваше мастерство выйдет на новые рубежи, позволяя с каждым разом делать все лучше и лучше.

На сегодня всё!

Удачи вам!

И прекрасных моделей!

Понравилась статья? Обязательно расскажи друзьям:

Нужны другие материалы по этой теме? Читайте:

Женщины уже давно окрашивают волосы дома, процесс этот достаточно простой, но как и все другие процедуры имеет свои правила особенности и этапы.

Этап 1 – подбор красителя

Выбор красителя зависит от структуры ваших волос и состояния кожи головы, например если на коже головы вы обнаружили ранки или у вас есть кожное заболевание, то окрашивание в таких случаях противопоказано, оно может только усугубить ситуацию.

Для того, чтобы определить цвет волос приподнимите прядь волос и взгляните на нее на просвет, так как в общей массе волосы кажутся темнее, чем они есть на самом деле. Если у вас химическая завивка, то рекомендуется применять тонирующие средства, они придадут блеск волосам и улучшат их структуру.

Этап 2 – тест на восприимчивость красителя

Тест на восприимчивость к краске необходим для того, чтобы определить есть ли у вас аллергия. Проводится он следующим образом: небольшое количество красителя наносится на кожу за ухом на 24 часа. Если в течение этого времени кожа покраснела или появились раздражения, то от краски лучше отказаться.

Этап 3 - Предварительное мытье

Непосредственно перед окраской волос не следует мыть голову, это необходимо чтобы на коже головы осталась жировая прослойка, она защитит волосы и кожу головы.

Если все таки ваша голова слишком грязная, то помойте волосы шампунем без использования бальзама и при этом не мойте кожу головы.

Этап 4 – нанесение красителя

При нанесении краски парикмахеры рекомендуют соблюдать следующие правила:
1. Края лба, а так же височную часть перед окрашиванием смажьте жирным кремом, он защитит эти зоны от окрашивания и раздражения. Так же можно воспользоваться маслом или вазелином.
2. При покраске обязательно надевайте защитные перчатки, так как краска разрушает ногти и кожу рук.
3. Не разводите краску в металлической посуде, так же не используйте металлические инструменты для окрашивания. Краска и металл образуют соединения, которые негативно сказываются на волосах и качестве краски.
4. Смешивать краситель необходимо непосредственно перед нанесением, если краска будет стоять долгое время, то она окислится и интенсивность вашего цвета будет слабее.
5. Для удобства волосы следует разделить на 4 части, разделите макушку двумя перпендикулярными проборами. После этого нанесите краску сначала по проборам, затем переходите к затылочной части. Обычно волосы там темнее, и необходимо дольше времени на их окрашивание. На височные зоны, и на волосы у лба краску наносят в последнюю очередь, так как в этих частях самые тонкие волосы. Если вы решили высветлить отдельные пряди больше остальных волос, то покрасьте сначала их, а затем остальные волосы.
6. При окрашивании в яркие красные тона, краску сначала наносим на волосы по всей длине, не затрагивая при этом корни и кончики, и только потом на эти зоны.
7. Наносите краску быстро, это необходимо, чтобы цвет был равномерным. Процедура окрашивания не должна длиться больше 15 минут.
8. Окрашивайте волосы по прядям, чем гуще у вас волосы, тем тоньше берите пряди, чтобы краска смогла их хорошо пропитать.
9. Если вы красите волосы в светлый цвет, то сначала нанесите краску на отросшие корни и выждите 10-15 минут, затем оставшуюся краску распределите по всей длине.

Этап 5 – смывание краски

Смывать краску следует тщательно, теплой водой, без шампуня и бальзама. Если ваша краска содержит закрепитель цвета или специальный бальзам то используйте его. Промывайте волосы до тех пор пока вода не станет абсолютно прозрачной.

Этап 6 – уход за окрашенными волосами

Любая краска вредит волосам, поэтому для окрашенных волос необходим правильный уход. Если вы хотите сохранить яркость цвета, то используйте маски и шампуни специально для окрашенных волос. Подробнее об уходе за окрашенными волосами читайте .